摘要

  将30例心脏瓣膜置换术患者，随机分为地氟醚组和对照组，应用流式细胞仪检测围术期血浆核因子（NF）-_ΚB活性， ELISA法检测围术期血浆TNF-α水平。结果 两组NF-_ΚB、TNF-α水平，体外循环（CPB）后较CPB前显著增加(P均<0.05)，CPB后各时点对照组NF-_ΚB和TNF-α活性显著高于地氟醚组(P均<0.05)。提示地氟醚可能通过抑制NF-_ΚB的表达，进而抑制TNF-α活性，减轻了CPB时的全身炎症反应，发挥心脏保护作用。

【关键词】核因子-_ΚB；肿瘤坏死因子-α；体外循环；全身炎症反应

2007年9月至2008年3月，我们对30例心脏瓣膜置换术地氟醚麻醉患者血浆核因子（NF）-_ΚB和TNF-α活性水平进行观察，旨在探讨地氟醚心脏保护作用的可能机制。

1 资料与方法

1.1  一般资料  瓣膜置换术心脏病患者30例，男15例，女15例；年龄（39.5±2.7）岁，体质量（55.2±6.7）㎏，术前无原发性肺、肝、脑、肾疾病。随机分为对照组与地氟醚组各15例。其一般资料具有可比性。

1.2  麻醉方法  两组均予咪唑安定0.2mg/kg、芬太尼10µg/kg、维库溴铵0.2mg/kg行麻醉诱导；麻醉维持：对照组用芬太尼，30µg/kg～50µg/kg；地氟醚组吸入地氟醚，吸入浓度7%～10%，以平均动脉压（MAP）的变化调节（基础值±20%）。两组均间断静注维库溴铵维持肌松。

1.3  检测方法 ：两组分别于体外循环（CPB）前（T₀）、主动脉开放后10min（T₁）、主动脉开放1h（T₂）采集动脉血置于两抗凝试管中。一试管立即行2000r/²耀n离心10min,取血浆标本于-70℃保存，采用ELISA法测定TNF-α。另一试管立即送流式细胞术室，行NF-_ΚB检测^［1］。

取经抗凝处理的标本，加入等量FACS 溶解剂，室温20min，加PBS液漂洗1次。立即加入250µl溶解液A、200µl溶解液B和RNaseA，室温10min，1500r/min离心5min，弃上清，即得单细胞悬液。悬液中加PBS液0.5ml，调整细胞数为1×10⁶/ml。吸取单细胞悬液10µl置于载玻片一端，制备涂片。采用Wright-giemsa混合一次涂色法染色。镜下证实制备好的悬液确为单细胞核悬液。取单细胞核液50µl加入NF-_ΚBp65McAb40µl，室温孵育20min后PBS液漂洗1次。FITC-IgG1µl,室温孵育20min，同上。PI20µl，置暗色30min后，PBS液漂洗，上机测试。FITC 标记的IgG作为阴性对照。

1.4 统计学方法  采用SPSS100软件分析所有数据以x±s表示。两样本间比较采用t检验。

2  结果

两组各时点NF-_ΚB、TNF-α表达情况见表1，表2

3 讨 论

NF-_ΚB是细胞内重要的转录因子，在调节免疫应答以及炎症反应、应激反应、细胞凋亡、增殖、分化等病理过程中均发挥重要作用。正常情况下，NF-_ΚB以二聚体的形式与其抑制蛋白家族I-_ΚB结合形成复合物，存在于胞质内而无活性。当外界信号刺激时，休克病因或细胞因子可激活细胞内的I-_ΚB激酶，使I-_ΚB的丝氨酸残基发生磷酸化从而NF-_ΚB的复合物中解离并被降解，NF-_ΚB二聚体被活化，并向胞核迅速移位，与多种促炎细胞（如TNFα、IL-1、IL-6等）基因启动子区的 kappa B位点结合，激活这些基因的转录活性，导致炎症介质的泛滥。目前认为NF-_ΚB/I-_ΚB信号通路的激活是感染、创伤及休克等炎症反应的中枢环节。

CPB是非生理过程,使血液与人工心肺机管道接触,以及血液动力学的急剧改变,可迅速启动炎性的级联反应,导致严重的全身性炎症反应综合征(SIRS)。目前认为,与CPB炎性反应有关的细胞因子有IL-1、IL-2、TNF-α,这些物质的生成受到NF-_ΚB的调节。因此研究如何抑制NF-_ΚB的激活,减少促炎基因的表达,从而减轻组织损伤和炎性反应,在CPB过程中具有重要意义。Kacimi等报道，培养的心肌细胞缺氧再给氧时,NF-_ΚB被激活,其活性与心肌损伤有关系。Elizabeth^［2］和Maulik分别报道了NF-_ΚB参与心肌的缺血预适应,提示NF-_ΚB与心肌缺血再灌注关系密切。Brar等^［3］在培养的小鼠胚胎心肌细胞缺血再灌注模型上发现，p65与心肌细胞凋亡与坏死有关。

NF-_ΚB是CPB中诱发炎症介质释放的主要因子,内毒素则是诱发TNF-α分泌的最强烈刺激物。CPB阻断期间低流量灌注,造成胃肠黏膜屏障与血管床的损伤,导致大量细菌内毒素进入全身循环,激活NF-_ΚB形成正反馈的级联放大效应，进而导致心肌细胞凋亡和坏死,发生心功能衰竭。

实验证明，挥发性麻醉药能降低心肌缺血再灌注损伤所致的心律失常发生率，改善心肌功能。关于地氟醚的心肌保护机制有多种说法。本研究两组CPB后NF-_ΚB和TNF-α活性显著增高。但地氟醚组显著低于对照组，表明地氟醚可能抑制再灌注期间的NF-_ΚB和TNF-α。我们认为，在心脏瓣膜置换术中采用地氟醚维持麻醉，有利于减轻心肌损伤。其可能机制是抑制NF-_ΚB的表达的上调，减轻全身炎症反应。

【参考文献】

[1]王选，牛清华，赵浩亮，等.核因子-kappa B 激活在临床急性胰腺炎中检测[J].临床医药实践杂志，2004，13（9）：657-659.

[2] Elizabeth N, Morgan MD,EdwardM,etal.An essential role of NF-_ΚB

In the cardioadaptive response to ischemia[J] .Ann Thorac Surg,1999,68

(2):377-382.

[3] Brar,BK, Stephanoua A,Okosib A,et al.CRH-like peptides protect car

Diac myocytes from lethal ischaemic injury[J].Mol Cell Endocrinol,1999,

158(1-2):55-63.