目的:拟探讨促红细胞生成素细胞对缺氧后大鼠海马神经元缺氧后复氧后的影响。 方法:将新生Wistar大鼠(出生时间<12h)解剖、酶解、吹打、种植,取培养9~10天的32皿大鼠海马神经元随机分为2对照组和药物组。将海马神经元放入密闭缺氧装置容器中,并充95%N2+5%CO2气体4h,流速为0.2L/min。分别于复氧后24h进行相关指标测定。四唑盐(MTT)比色法测定海马神经元的存活率,海马神经元的存活率=缺氧后光密度值(OD)/正常对照组光密度值(OD)×100%。细胞培养LDH液漏出值,光密度值的大小与LDH的含量成正比,可以间接反应细胞受损的程度。激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Ca2+荧光值。每皿中加入荧光探针Fluo-3-AM至终浓度为7.5μmol/L。置于激光共聚焦显微镜上,采集时均选取一系列光学切片中荧光强度最大的一幅图像,得到不同处理组细胞内Ca2+变化的相对荧光强度值。 结果:药物组细胞存活率明显高于对照组,其生存率分别为(66±10)%、(47±12)%(p<0.01);药物组LDH液漏出值1.17±0.09,对照组为1.76±0.15(p<0.01);药物组、对照组Ca2+荧光值分别为7175±760,5977±388(p<0.01)。 结论:促红细胞生成素对大鼠海马神经元的缺氧复氧后损害有保护作用,促红细胞生成素提高大鼠海马神经元缺氧复氧后的生存率,减少LDH的漏出。其机制可能与促红细胞生成素抑制钙超载更明显有关。 |