目的：研究脂多糖诱导的细胞内信号传导途径之一－酪氨酸磷酸化在肺泡巨噬细胞表达明胶酶B中的作用，进一步明确内毒素诱导肺泡巨噬细胞表达明胶酶的信号转导机制。

方法：①以10μg/ml 脂多糖刺激肺泡巨噬细胞15min、30min、60min、90min，观察不同时间脂多糖对肺泡巨噬细胞酪氨酸磷酸化影响。②另取部分肺泡巨噬细胞分为空白组、单纯脂多糖组、酪氨酸激酶抑制剂Herbimycin A处理组。在Herbimycin A处理组，肺泡巨噬细胞先与Herbimycin A（25μM, 50μM, 100μM）孵育30min，然后再接受脂多糖刺激15min，观察不同作用浓度Herbimycin A对酪氨酸磷酸化影响；并选择可显著抑制酪氨酸磷酸化的Herbimycin A作用浓度，以观察其对明胶酶B 表达和核因子κB（NF-κB）活性的影响。③再另取肺泡巨噬细胞分为空白组、单纯脂多糖组、NF-κB活化抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC，100μM）处理组。在PDTC处理组，肺泡巨噬细胞先与PDTC孵育30min，然后再接受脂多糖刺激15min，观察PDTC对酪氨酸磷酸化影响。通过免疫细胞化学方法和Western免疫印迹分别检测酪氨酸磷酸化程度和NF-κB活性的变化；以逆转录聚合酶链反应法和酶谱法分别检测明胶酶B mRNA、蛋白质的表达。

结果：①细胞免疫化学结果显示，未受到刺激肺泡巨噬细胞仅存在低水平的酪氨酸磷酸化；脂多糖作用后，酪氨酸磷酸化程度迅速增强，15min达峰值，然后逐渐降低；与2h时，酪氨酸磷酸化接近基础值。②Herbimycin A，在终浓度为25μM时，显著抑制脂多糖（作用15min）诱导酪氨酸磷酸化（P<0.05，vs 脂多糖组）；当浓度为50μM时，抑制程度加强（P<0.01，vs 25μM组）；当作用浓度进一步升高（100μM），抑制效果并没有随之改变（P>0.05，vs 50μM组）。Herbimycin A（50μM）显著抑制脂多糖诱导的明胶酶B mRNA和蛋白质的表达（P<0.01，vs脂多糖组）；此时mRNA为脂多糖组的67％，活性为63％。脂多糖刺激15min时，Herbimycin A（50μM）显著降低细胞核内p65含量（P<0.01 vs 脂多糖组），增加了细胞浆内的含量（P<0.01 vs 脂多糖组）。③PDTC（100μM）处理没有显著改变脂多糖诱导酪氨酸磷酸化程度（P > 0.05 vs 脂多糖组）。

结论：脂多糖刺激肺泡巨噬细胞表达明胶酶B过程中，蛋白质酪氨酸磷酸化发挥了重要作用，该位点在信号转导通路中位于NF-κB上游。