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NR2B多肽疫苗对大鼠慢性神经痛的免疫超前镇痛作用
时间：2010-08-23 14:32:59 来源： 作者：
| 体，利用抗体下调或清除该蛋白治疗疾病。NR2B是神经元胞膜NMDA受体的2B亚基，异位表达可能诱导机体产生抗体。NR2B的过表达在慢性神经痛的产生和维持中起到重要作用。因此提出假设： NR2B镇痛疫苗免疫SD大鼠产生NR2B抗体，该抗体可下调慢性神经痛时脊髓背角NR2B的过表达产生超前镇痛作用。 目的 探讨NR2B多肽疫苗的免疫效应及对大鼠慢性神经痛的超前镇痛作用。 方法 选取NR2B有免疫原性的一段氨基酸合成多肽，并与大分子蛋白载体匙孔虫戚血蓝蛋白( Keyhole LimpetHemocyanin , KLH)交联制备NR2B多肽疫苗即NR2B-KLH。 21只雌性SD大鼠随即分为三组：PBS组（n=6）；KLH组（n=6）；NR2B组（n=9），分别用PBS＋福氏佐剂，KLH＋福氏佐剂和NR2B-KLH＋福氏佐剂免疫SD大鼠三次（背部皮下多点注射），每次间隔14天。每次免疫后14天自眶后静脉丛取血0.5～1ml采用间接ELISA法检测大鼠血清中NR2B特异性抗体滴度。第三次免疫后7天，结扎并切断胫神经、腓总神经，保留腓肠神经，建立SNI慢性神经痛模型。术后隔日以up-and-down的方法测定大鼠后趾50％缩爪阈值的变化。SNI慢性神经痛模型建立后7天，处死大鼠取腰段脊髓（L4～L6）采用Western blot法检测脊髓背角NR2B蛋白质的表达。SNI慢性神经痛模型建立后7天，NR2B组再分为两个亚组，一组（n=5）用于脊髓背角NR2B蛋白质表达的分析，一组（n=4）用于血清NR2B抗体的检测。 结果 第二次免疫后，NR2B组 9只大鼠有6只产生NR2B抗体（＞0.5μg/ml），第三次免疫后9只大鼠均出现特异性NR2B抗体（＞2.2μg/ml），且滴度明显升高。第一次免疫后42天抗体滴度最高（7.2μg/ml），随后抗体滴度逐渐降低，但免疫后70天血清中仍可检测到NR2B抗体。而PBS和KLH组未检测到NR2B抗体。 与结扎术前比较，术后第7天各组50％缩爪域值均明显降低（p＜0.05），但组间比较，NR2B组明显高于PBS组和KLH组(p＜0.05)。 术后7天脊髓背角NR2B蛋白的表达水平NR2B组明显低于PBS组和KLH组（p＜0.05）。 结论 NR2B多肽疫苗可诱导机体产生抗体；该疫苗对大鼠慢性神经痛有超前镇痛作用，其机制可能与下调脊髓背角NR2B的过表达有关。 |
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