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大鼠鞘内注射单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体介导人前脑啡肽原基因的表达及对福尔马林炎性痛的镇痛效应

时间:2010-08-23 14:33:26  来源:  作者:

       方法   纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES -LacZ空白载体组(SHZ),生理盐水组(NS),又分为分别注射3 d、1 w、2 w、3 w、4 w、5 w后观察镇痛效应及转染表达组,每组6只。采用改良Yaksh法对大鼠进行鞘内置管后,将构建好的含HPPE的重组单纯疱疹病毒I型扩增子载体注入大鼠鞘内,通过X-gal染色原位检测LacZ的表达,RT-PCR方法检测HPPE的表达,放免检测脊髓脑啡肽浓度,并观察在大鼠福尔马林炎性疼痛的镇痛效应。

       结果   在体感染大鼠中枢神经细胞后,用X-gal染色、RT-PCR和放免检测证实外源脑啡肽基因能有效表达。对福尔马林诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于第1 w、2 w、3 w、4 w时在第一相和第二相与对照组比较有显著性差异,于第5 w时第二相PIS加权评分值接近对照组,对福尔马林的抗伤害作用可被鞘内注射纳洛酮拮抗。

       结论   SHPZ能成功地将外源HPPE转染到脊髓神经元细胞中,使之有效表达,提示扩增子载体SHPZ是良好的慢性疼痛转基因治疗工具;HPPE的表达产物对福尔马林炎性痛产生镇痛效应。 

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