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方法 纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES -LacZ空白载体组(SHZ),生理盐水组(NS),又分为分别注射3 d、1 w、2 w、3 w、4 w、5 w后观察镇痛效应及转染表达组,每组6只。采用改良Yaksh法对大鼠进行鞘内置管后,将构建好的含HPPE的重组单纯疱疹病毒I型扩增子载体注入大鼠鞘内,通过X-gal染色原位检测LacZ的表达,RT-PCR方法检测HPPE的表达,放免检测脊髓脑啡肽浓度,并观察在大鼠福尔马林炎性疼痛的镇痛效应。 结果 在体感染大鼠中枢神经细胞后,用X-gal染色、RT-PCR和放免检测证实外源脑啡肽基因能有效表达。对福尔马林诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于第1 w、2 w、3 w、4 w时在第一相和第二相与对照组比较有显著性差异,于第5 w时第二相PIS加权评分值接近对照组,对福尔马林的抗伤害作用可被鞘内注射纳洛酮拮抗。 结论 SHPZ能成功地将外源HPPE转染到脊髓神经元细胞中,使之有效表达,提示扩增子载体SHPZ是良好的慢性疼痛转基因治疗工具;HPPE的表达产物对福尔马林炎性痛产生镇痛效应。 |
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