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ω-芋螺毒素SO3是我国军事医学科学院通过分子生物学手段从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。有初步实验证实鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对急、慢性疼痛均有镇痛作用,但对其镇痛机理目前国内外均未有深入研究。 目的: 通过研究鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤(CCI模型)大鼠脊髓Fos、Jun蛋白表达的影响,探讨N型钙通道在伤害性信息传递中的作用。 方法: 健康清洁级雄性SD大鼠72只,体重230~270g,由军事医学科学院实验动物中心提供。随机均分为9组,其中3组为假手术或单纯制作CCI模型后3d、14d;3组为鞘内置入PE-10导管后单次鞘内注射生理盐水20μL或ω-芋螺毒素SO3 300ng或600ng后4h;另3组为鞘内置入PE-10导管后经微量渗透泵(美国Alzet公司生产,型号为2001,容积200μL,释放速率1μL/hr)持续鞘内注射生理盐水1μL/h或ω-芋螺毒素SO3 30ng/h或60ng/h共7d。在预定时间点,经左心室灌注4%多聚甲醛,取L4-L6段脊髓制备石蜡切片。采用标准链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶亲和免疫组织化学方法,用相应抗体行免疫组织化学染色,采用Image-Pro® Plus图像分析系统(Version 4.5.0.19, Cybernetics公司)进行各组动物脊髓标本浅层、固有核、颈部和腹侧灰质等各层Fos蛋白免疫反应阳性(Fos-like immunoreactivity, F-LI)或Jun蛋白免疫反应阳性(Jun-like immunoreactivity, J-LI)神经元计数。组间比较采用单因素方差分析。以P<0.05作为差异显著性标准。 结果: 大鼠CCI术后全部出现神经痛表现。鞘内置管后动物有短暂的轻度下肢运动功能障碍,第二天全部恢复正常。各组均未见行为学异常等毒副作用表现。正常大鼠双侧脊髓背角可见极少量F-LI细胞。CCI组坐骨神经结扎后F-LI神经元数目开始逐渐增加,14天时达到较高水平。对侧背角内也有较多量F-LI阳性细胞散在分布。单次或持续鞘内注射生理盐水对其无明显影响;单次或连续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3后,镜下均可见结扎侧脊髓背角各层F-LI阳性细胞显著减少,与i.t.生理盐水组相比差异显著(P<0 01)。两种给药方式中高剂量组的作用均强于低剂量组;连续用药效果更明显。J-LI神经元在脊髓中的分布及其各组间的变化趋势与F-LI相似,但其绝对记数多于F-LI神经元。 结论: 神经损伤后脊髓Fos、Jun蛋白表达增加,鞘内注射ω-芋螺毒素SO3可以减轻此种反应,提示N型钙通道阻滞剂在脊髓水平可以部分阻断伤害性信息传递。 |
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