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神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经型一氧化氮合酶的多样性及变化
时间：2010-08-23 14:34:17 来源： 作者：
| 方法： 雌性SD大鼠20只，体重150～200g，随机分为2组（n=10），对照组和SNI组。 SNI组于左肢制备坐骨神经保留性神经损伤模型（SNI），对照组实施假手术。分别于术前3d、术后即刻、术后1、3、5、7、9、11d测定大鼠对机械刺激产生缩腿反应的次数。术后11d痛觉测定后，每组取3只大鼠用于灌注，应用免疫组织化学方法检测脊髓nNOS的表达。7只大鼠断头处死后分离L4-6脊髓，提取其中3只大鼠脊髓的蛋白质，应用抗nNOS羧基端抗体和Western Blot方法检测nNOS的表达，提取其中4只大鼠脊髓的RNA，1只大鼠脊髓RNA进行RACE-PCR和Southern Blot实验检测nNOS不同的mRNA；余下3只大鼠脊髓的RNA用于检测nNOS的mRNA变化。 结果： SNI组术后3d机械刺激术侧后爪引起缩腿反应的次数高于对照组（P<0.05），术后5d SNI组各时间点缩腿反应的次数差异无统计学意义（P>0.05）。nNOS主要表达于脊髓背角的Ⅰ～Ⅱ层和Ⅴ～Ⅵ层中线附近，SNI组nNOS表达灰度高于对照组（P<0.05）。Western Blot结果显示有三种分子量的nNOS表达，分别位于155、135和125KD左右，155KD的nNOS表达的相对灰度SNI组高于对照组（P<0.05）；135KD的nNOS表达的相对灰度SNI组高于对照组（P<0.05）；而125KD的nNOS表达的相对灰度两组差异无统计学意义（P>0.05）。RACE-PCR和Southern Blot实验证实有三种nNOS（nNOSα、β和γ）的mRNA表达。PCR结果显示nNOSα/nNOSβ表达的比值对照组高于SNI组。 结论： 大鼠脊髓背角有三种神经型一氧化氮合酶（nNOSα、β和γ）表达；神经病理性疼痛时nNOSα表达升高，而nNOSβ降低，可能与疼痛的机制有关。 |
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