Page 24 - 麻醉与监护论坛2015年第4期
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Laboratory and Clinical Investigation

     随着城市发展，交通事故发生率逐年升高，创伤患者                      浓度P C T标准品100u l，37℃振荡30m i n，1000g离心10m i n，
常伴有组织严重破坏、大出血、休克、生理功能紊乱等特                         PBS洗涤，1000g离心10min，500ulPBS重悬加300ul鼠抗人PCT
点，而老年患者免疫功能低下，更易发生感染导致多器官                         单克隆抗体，37℃振荡30m i n，1000g离心10m i n，200u l P B S
功能障碍，因此早期正确评估病情及监测对老年创伤患者                         重悬，加300u l生物素化羊抗鼠I g G抗体，37℃孵育30m i n，
至关重要。老年创伤患者常伴有应激性白细胞升高、中枢                         3000rpm/min离心10min，加300ul链霉亲和素化量子点，37℃
性高热，病原学检查诊断周期长且阳性率较低。降钙素原                         孵育30min，PBS洗涤2次，400ulPBS重悬，FACSort流式细胞
（procalcitonin,PCT）是降钙素的前肽物质[1]，机体受到创             仪计数3500个微球，取FSC/SSC散点图和FL-1直方图，流式直
伤后大量产生，与创伤严重程度及预后密切相关[2]。目前，                      方图显示微球表面平均荧光强度(MFI)，X轴为荧光强度，Y轴
临床对PCT检测主要采用半定量法。本研究将量子点荧光探针                      为微球数量。
与流式技术结合，建立一种定量检测PCT的方法，并通过本方
法对创伤老年患者P C T水平进行检测，观察老年创伤患者P C T                      4.方法学评价
水平变化趋势；监测PCT水平、APACHEⅡ评分及CRP水平变化                       对本实验自创法的灵敏度、线性范围、精密度、阳性临
趋势，分析指标之间相关性，探讨对临床早期正确诊断老年                        界点进行初步评价。
创伤患者病情、监测病情改变、预测并发感染及预后的临床                             5.临床初步应用
价值。                                                    高I S S组、低I S S组及对照组抽取静脉血，分离血清，通
                                                  过本实验建立法检测血清P C T水平，特种蛋白仪检测C R P水
    一、资料与方法                                       平。
                                                       6.统计学分析
     1.检测标本                                            数据采用S P S S17.0统计软件对检验结果进行统计学分
     2012年1月至2012年8月我院重症监护室（ICU）收治的老              析，计量资料比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意
年创伤患者77例，符合标准：①年龄≥60岁；②合并S I R S；                 义。
③创伤严重程度评分I S S≥16；④受伤至入住I C U<4h；所有
患者给予生命支持，24h内给予肠内营养以减少细菌迁移发                           二、结果
生。根据创伤严重程度，分成低I S S组：16≤I S S<25，45
例；高I S S组：I S S≥25，32例；对照组选自我院体检中心健                    1.微球观察（图1）
康老年者30例。                                               电子显微镜对聚苯乙烯微球进行初步观察，显示微球粒
     2.检测方法                                       径均一性好，高度分散性，无聚集现象，形态规则，无畸形
     创伤后第1d、3d、5d、7d、10d抽取静脉血液，分离血                球，可用于本研究生物分子的标记。
清，创伤老年患者各吸取20u l血清混合成创伤混合血清（供
建立方法所用），对照组每位老人也吸取20u l血清混合成健                      图1 聚苯乙烯微球电子显微镜照片
康混合血清（供建立方法所用），通过本实验建立的定量检                         Figure 1 The SEM of PS microspheres
测PCT法进行测定。
     （1）主要试剂                                           2.灵敏度试验
     羊抗人P C T多克隆抗体、鼠抗人P C T单克隆抗体（上海雅                   采用自创法对空白样本和含有500p g/m l P C T标准品检
吉生物科技有限公司）、量子点525nm试剂盒（包括生物素化                     测20次，求均值、标准差、灵敏度。自创法测得空白样本
羊抗鼠I g G抗体、链霉亲和素量子点）、微球偶联剂（B a n g s              M F I值为4.54，标准差为0.75；500p g/m l的P C T标准品M F I值
L a b o r a t o r i e s，I n c实验室）、10u m聚苯乙烯微球（天津  为29.31，标准差为5.17。500p g/m l的M F I值减去空白样本
大学材料学院赠予）、磷酸盐缓冲液（P B S）：0.01m o l/                M F I值为24.77，按照99.7%可信区间，空白样本3倍标准差
L,PH=7.4。                                         为0.75×3=2.25，因此，当M F I值为2.25时相当于检测灵敏
     （2）主要仪器                                      度:2.25/24.77×500=45.42pg/ml。
     F A C S o r t流式细胞仪(美国B e c k m a n公司)、高速离心机       3.线性范围试验（图2）
（S i g m a公司）、振荡仪（义乌市华力热熔胶有限公司）、
752型紫外可见分光光度计（上海欣茂仪器）、电子显微镜
（OLYMPUS）
     3.方法学建立
     吸取微球溶液，1000g离心10min，400ulPolyLink溶液重
悬，1000g离心10min，150ul PolyLink溶液重悬，10ulEDC.
H C L溶液混匀，羊抗人P C T多克隆抗体200u l，37℃振荡1h，
1000g离心10min，PolyLink溶液稀释成适当浓度（109-1012个
/L），4℃保存。200u L包被抗体微球，加入血清标本或不同

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